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產(chǎn)品介紹 Mouse IL-12/23 (p40) ELISA Kit (Mouse Interleukin-12/23 (p40) Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit) ，即小鼠白細(xì)胞介素 12 ELISA 試劑盒，可以定量檢測小鼠血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液等樣本中的天然和重組 IL-12/23 (p40)濃度。白細(xì)胞介素 12，也稱為自然殺傷細(xì)胞刺激因子或細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞成熟因子，是一種多效性細(xì)胞因子，主要由活化的巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和中性粒細(xì)胞產(chǎn)生，有致炎作用和免疫調(diào)節(jié)作用。IL-12 的是由二硫鍵相連異源二聚體，70 kDa (p70)的異二聚體糖蛋白由 40 kDa (p40)和 35 kDa (p35)兩個(gè)亞基組成。p40 和 p35 亞基沒有 IL-12 的活性，但 p40 同型二聚體可與 IL-12 的受體結(jié)合，是 IL-12 的拮抗劑。IL-12 等電點(diǎn)為 pH4.5-5.5。小鼠 IL-12 P35 有 193 個(gè)氨基酸殘基，與人 IL-12 P35 有 66％同源性，小鼠 P40 有 313 個(gè)氨基酸殘基與人 P40 有 70％同源性。鼠 IL-12 對人類和小鼠細(xì)胞均有活性，人IL-12 作用有種屬特異性，人 IL-12 對小鼠細(xì)胞作用甚微。IL-12 的生物學(xué)功能包括體外效應(yīng)和體內(nèi)效應(yīng)。體外效應(yīng)：IL-12 能誘導(dǎo) PHA 刺激的 T 細(xì)胞增殖。IL-12 能增加 CD56 ＋NK 細(xì)胞的活性；誘導(dǎo) NK 細(xì)胞或 PBMC 增殖和產(chǎn)生 LAK 活性，增加 NK 細(xì)胞表達(dá)表面分子；促進(jìn) NK 細(xì)胞產(chǎn)生 IFN-γ 和 TNF-α（TGF-β和 IL-10 抑制該效應(yīng)）。IL-12 在 BCG 和 LPS 誘導(dǎo)的小鼠炎性休克所致的死亡中起重要作用。IL-12 通過誘導(dǎo) TNF-α和 IFN-γ，抑制骨髓造血。IL-12 還有抗血管生成作用。體內(nèi)效應(yīng)：將 IL-12 輸入動物體內(nèi)可以增強(qiáng) NK 細(xì)胞的殺傷活性、增加 IFN-γ分泌、啟動造血細(xì)胞大量生成、增強(qiáng)異體排斥反應(yīng)并可能介導(dǎo)抗腫瘤效應(yīng)。IL-12 在某些 Th1 介導(dǎo)的自身免疫疾病中起重要作用。IL-12 誘導(dǎo)動物脾腫大，其中含有大量造血細(xì)胞，紅細(xì)胞系、髓樣細(xì)胞系和巨核細(xì)胞系都增加。IL-2 抑制骨髓造血的作用可能與誘導(dǎo) NK 細(xì)胞產(chǎn)生 IFN-γ等有關(guān)。在小鼠腫瘤模型中，IL-12 的抗腫瘤作用依賴 IFN-γ的增加，且與 IL-2、IFN-α以及一些化學(xué)治療藥物有協(xié)同抗腫瘤作用。IL-12 發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)所需的細(xì)胞因子濃度很低(≤pM)， 與合適劑量 IL-2 聯(lián)合應(yīng)用可降低 IL-2 用量，同時(shí)提高 CTL、NK、LAK 的殺傷活性，因此 IL-12 可能成為一種新的抗腫瘤生物制劑。本試劑盒采用雙抗體夾心 ELISA 法檢測樣品中小鼠 IL-12/23 (p40)濃度。在小鼠 IL-12/23 (p40)單克隆抗體預(yù)包被酶標(biāo)板中加入適度稀釋的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，其中的 IL-12/23 (p40)會與其單抗結(jié)合，洗去游離成分；加入生物素化的抗小鼠 IL-12/23 (p40)抗體，抗小鼠 IL-12/23 (p40)抗體與結(jié)合在單抗上的小鼠 IL-12/23 (p40)結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，洗去游離的成分；加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的親合素，生物素與親合素特異性結(jié)合，洗去未結(jié)合的酶結(jié)合物；加入顯色劑，若反應(yīng)孔中有 IL-12/23 (p40)，辣根過氧化物酶會使無色的顯色劑出現(xiàn)藍(lán)色；加終止液變?yōu)辄S色。在 450 nm 下測 OD 值，小鼠 IL-12/23 (p40)濃度與 OD 450 值之間呈正比，可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中小鼠 IL-12/23 (p40)濃度。
UE-M6142S/M6142M/M6142L◆沒有信號？1.試劑添加順序錯(cuò)誤或試劑配制不正確。重復(fù)實(shí)驗(yàn)；檢查試劑配制方法；復(fù)核試驗(yàn)試劑添加流程。2.HRP被疊氮化合物污染。使用新鮮配制的試劑。3.抗體用量不足。檢查是否使用了推薦的抗體量；增加抗體用量（濃度）。4.使用了含胎牛血清的緩沖液復(fù)溶抗體。檢查使用的試劑。5.捕獲抗體與板結(jié)合較差。使用ELISA板，而非組織培養(yǎng)板；使用不含其他雜蛋白的PBS溶解抗體。6.緩沖液受污染。新鮮配置緩沖液。◆整塊板呈現(xiàn)規(guī)則藍(lán)色？1.洗板不充分或跳過洗滌步驟未去除殘留的非結(jié)合過氧化物酶。嚴(yán)格按照說明書洗滌流程操作。2.底物溶液預(yù)混太早不新鮮。底物溶液混合后須立即使用。3.封板膠紙或試劑儲液槽重復(fù)使用導(dǎo)致HRP殘留污染。每步均需使用新的封板膠紙或試劑儲液槽。4.緩沖液有金屬或HRP污染。新鮮配置緩沖液。◆標(biāo)準(zhǔn)曲線差？1.鏈親和素-HRP結(jié)合物量不足。檢查倍性稀釋是否正確。2.捕獲抗體與板結(jié)合較差。使用酶標(biāo)板，而非組織培養(yǎng)板；使用不含其他雜蛋白的PBS溶解抗體。3.檢測抗體量不足。檢查稀釋度是否正確。4.孵育時(shí)間不足。延長底物溶液孵育時(shí)間。5.實(shí)驗(yàn)操作流程有誤。嚴(yán)格按照說明書操作流程。6.標(biāo)準(zhǔn)曲線稀釋計(jì)算錯(cuò)誤。重新計(jì)算制作新的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
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