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產(chǎn)品介紹 Human Leptin ELISA Kit (Human Leptin Enzyme -Linked ImmunoSorbent Assay Kit) ，即人瘦素 ELISA 試劑盒，可以定量檢測人血清、血漿或細胞培養(yǎng)上清液等樣本中的天然和重組 Leptin 濃度。人瘦素蛋白是一種分子量為16 kDa，長度為146個氨基酸殘基，具有強親水性的非糖基化多肽，主要參與調(diào)節(jié)脂肪組織體積和能量平衡。成熟的人瘦素分別與小鼠和大鼠瘦素蛋白有87％和84％的同源性，已發(fā)現(xiàn)人瘦素在小鼠和大鼠系統(tǒng)中起作用。瘦素的表達是非常有限的，它主要由白色脂肪組織產(chǎn)生。白色脂肪組織分泌瘦素與體內(nèi)脂肪含量成正比，機體的體脂量是影響瘦素分泌的主要因素。此外，能量攝入的改變、睡眠、體溫、性別、自身的晝夜節(jié)律性、其它激素等均可影響其分泌和表達。一般來說，正常的血液中瘦素水平已發(fā)現(xiàn)的低于納克/毫升濃度。Leptin受體OB-R是Leptin作用于下丘腦的一座橋梁，Leptin通過下丘腦的特定受體抑制攝食、增加能量消耗，在脂肪蓄積、體重調(diào)節(jié)中起著重要作用。Leptin在血漿中的水平與脂肪組織量大小相關(guān)，當(dāng)人和鼠體重下降時，Leptin在血漿中的水平也隨之會下降。瘦素主要通過抑制食欲，減少能量攝入；增加能量消耗；抑制脂肪合成3種途徑調(diào)節(jié)機體脂肪的沉積、代謝，減輕體重。其中，前兩條途徑主要通過瘦素與其下丘腦的受體結(jié)合發(fā)揮其中樞作用而實現(xiàn)的。隨著LPR被發(fā)現(xiàn)廣泛分布在各外周組織，后一途徑就可能與它的外周作用有關(guān)。作為一種激素，瘦素具有抑制攝食，促進能量消耗，調(diào)節(jié)代謝，影響激素分泌、生殖、免疫和血管增生等廣泛的生物學(xué)作用，而這些作用的發(fā)揮需要與其特異的受體結(jié)合。改變循環(huán)瘦素水平可用來研究動脈粥樣硬化，生長激素缺乏癥，和飲食失調(diào)如神經(jīng)性厭食癥。本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法檢測樣品中人Leptin 濃度。在人Leptin單克隆抗體預(yù)包被酶標(biāo)板中加入適度稀釋的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，其中的Leptin會與其單抗結(jié)合，洗去游離成分；加入生物素化的抗人Leptin抗體，抗人Leptin抗體與結(jié)合在單抗上的人Leptin結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，洗去游離的成分；加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的親合素，生物素與親合素特異性結(jié)合，洗去未結(jié)合的酶結(jié)合物；加入顯色劑，若反應(yīng)孔中有Leptin，辣根過氧化物酶會使無色的顯色劑出現(xiàn)藍色；加終止液變?yōu)辄S色。在450 nm下測OD值，人Leptin濃度與OD 450值之間呈正比，可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣品中人Leptin濃度。
UE-H6133S/H6133M/H6133L◆沒有信號？1.試劑添加順序錯誤或試劑配制不正確。重復(fù)實驗；檢查試劑配制方法；復(fù)核試驗試劑添加流程。2.HRP被疊氮化合物污染。使用新鮮配制的試劑。3.抗體用量不足。檢查是否使用了推薦的抗體量；增加抗體用量（濃度）。4.使用了含胎牛血清的緩沖液復(fù)溶抗體。檢查使用的試劑。5.捕獲抗體與板結(jié)合較差。使用ELISA板，而非組織培養(yǎng)板；使用不含其他雜蛋白的PBS溶解抗體。6.緩沖液受污染。新鮮配置緩沖液。◆整塊板呈現(xiàn)規(guī)則藍色？1.洗板不充分或跳過洗滌步驟未去除殘留的非結(jié)合過氧化物酶。嚴(yán)格按照說明書洗滌流程操作。2.底物溶液預(yù)混太早不新鮮。底物溶液混合后須立即使用。3.封板膠紙或試劑儲液槽重復(fù)使用導(dǎo)致HRP殘留污染。每步均需使用新的封板膠紙或試劑儲液槽。4.緩沖液有金屬或HRP污染。新鮮配置緩沖液。◆標(biāo)準(zhǔn)曲線差？1.鏈親和素-HRP結(jié)合物量不足。檢查倍性稀釋是否正確。2.捕獲抗體與板結(jié)合較差。使用酶標(biāo)板，而非組織培養(yǎng)板；使用不含其他雜蛋白的PBS溶解抗體。3.檢測抗體量不足。檢查稀釋度是否正確。4.孵育時間不足。延長底物溶液孵育時間。5.實驗操作流程有誤。嚴(yán)格按照說明書操作流程。6.標(biāo)準(zhǔn)曲線稀釋計算錯誤。重新計算制作新的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
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