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注：終止液和顯色劑具有腐蝕性，一旦接觸到液體，請(qǐng)盡快用大量清水沖洗。
產(chǎn)品介紹Human IL-1β ELISA Kit (Human Interleukin-1β Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit) ，即人白細(xì)胞介素 1β ELISA 試劑盒，可以定量檢測(cè)人血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液等樣本中的天然和重組 IL-1β濃度。IL-1 分為 IL-1α、IL-1β兩種，完整的人 IL-1α和 IL-1β 基因組分別為 10.5 kb 和 7.8 kb。人和小鼠 IL-1 基因定位于 2 號(hào)染色體，均含 7 個(gè)外顯子。IL-1 前體(ProIL-1)為 31 kDa，通過(guò)蛋白水解酶裂解形成成熟的 IL-1 分子。IL-1 在不同種屬中有較高同源性。在氨基酸水平上，IL-1α和 IL-1β在不同種屬同源性分別為 60％-70％和 75％-78％；但在同一種屬中 IL-1α與 IL-1β同源性只有 25％。人 IL-1α和 IL-1β分別由 159 和 153 個(gè)氨基酸殘基組成，分子量約 17 kDa, 等電點(diǎn)分別為 5 和 7，同源性為 28%。IL-1 主要是通過(guò)與其受體結(jié)合形成 IL-1 受體 (IL-1R)復(fù)合物發(fā)揮生物學(xué)作用。T 細(xì)胞、成纖維細(xì)胞表面 IL-1R 為 80 kDa，而B(niǎo) 細(xì)胞則為68 kDa，分別稱為IL-1RI (CDw 121 a)和IL-1RⅡ(CDw 121 b)。IL-1受體復(fù)合物至少由IL-1α或IL-1β，Ⅰ型IL-1R (IL-1 RⅠ)，IL-1R 輔助蛋白 (IL-1 RAcP)三部分組成。這一復(fù)合物介導(dǎo)了 IL-1 的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。IL-1α和 IL-1β是 IL-1R 激動(dòng)性配基。IL-1 RAcP 是分子量約為 66 kDa 的多肽。細(xì)胞表面單獨(dú)存在的 IL-1RⅠ與配體結(jié)合后仍然是不活躍的，只有 IL-1RAcP 結(jié)合上去后，才能從不活躍狀態(tài)轉(zhuǎn)變成有激活功能的 IL-1 受體復(fù)合物。IL-1 與 IL-1RtⅡ結(jié)合后易發(fā)生降解，因此被認(rèn)為是下調(diào)受體。IL-1β主要由血液中的單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生, 星形細(xì)胞，少突神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞，NK 細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞，角質(zhì)形成細(xì)胞，巨核細(xì)胞，血小板，神經(jīng)元，中性粒細(xì)胞，成骨細(xì)胞，許旺細(xì)胞，滋養(yǎng)層細(xì)胞，T 細(xì)胞和成纖維細(xì)胞也可產(chǎn)生 IL-1β 。IL-1 具有廣泛的免疫調(diào)節(jié)作用，并有致熱和介導(dǎo)炎癥的作用。本試劑盒采用雙抗體夾心 ELISA 法檢測(cè)樣品中人 IL-1β濃度。在人 IL-1β單克隆抗體預(yù)包被酶標(biāo)板中加入適度稀釋的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，其中的 IL-1β會(huì)與其單抗結(jié)合，洗去游離成分；加入生物素化的抗人 IL-1β抗體，抗人 IL-1β抗體與結(jié)合在單抗上的人 IL-1β結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，洗去游離的成分；加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親合素，生物素與親合素特異性結(jié)合，洗去未結(jié)合的酶結(jié)合物；加入顯色劑，若反應(yīng)孔中有 IL-1β，辣根過(guò)氧化物酶會(huì)使無(wú)色的顯色劑出現(xiàn)藍(lán)色；加終止液變?yōu)辄S色。在 450 nm 下測(cè) OD 值，人 IL-1β 濃度與 OD 450 值之間呈正比，可通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中人 IL-1β濃度。
UE-H6129S/H6129M/H6129L◆沒(méi)有信號(hào)？1.試劑添加順序錯(cuò)誤或試劑配制不正確。重復(fù)實(shí)驗(yàn)；檢查試劑配制方法；復(fù)核試驗(yàn)試劑添加流程。2.HRP被疊氮化合物污染。使用新鮮配制的試劑。3.抗體用量不足。檢查是否使用了推薦的抗體量；增加抗體用量（濃度）。4.使用了含胎牛血清的緩沖液復(fù)溶抗體。檢查使用的試劑。5.捕獲抗體與板結(jié)合較差。使用ELISA板，而非組織培養(yǎng)板；使用不含其他雜蛋白的PBS溶解抗體。6.緩沖液受污染。新鮮配置緩沖液。◆整塊板呈現(xiàn)規(guī)則藍(lán)色？1.洗板不充分或跳過(guò)洗滌步驟未去除殘留的非結(jié)合過(guò)氧化物酶。嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)洗滌流程操作。2.底物溶液預(yù)混太早不新鮮。底物溶液混合后須立即使用。3.封板膠紙或試劑儲(chǔ)液槽重復(fù)使用導(dǎo)致HRP殘留污染。每步均需使用新的封板膠紙或試劑儲(chǔ)液槽。4.緩沖液有金屬或HRP污染。新鮮配置緩沖液。◆標(biāo)準(zhǔn)曲線差？1.鏈親和素-HRP結(jié)合物量不足。檢查倍性稀釋是否正確。2.捕獲抗體與板結(jié)合較差。使用酶標(biāo)板，而非組織培養(yǎng)板；使用不含其他雜蛋白的PBS溶解抗體。3.檢測(cè)抗體量不足。檢查稀釋度是否正確。4.孵育時(shí)間不足。延長(zhǎng)底物溶液孵育時(shí)間。5.實(shí)驗(yàn)操作流程有誤。嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作流程。6.標(biāo)準(zhǔn)曲線稀釋計(jì)算錯(cuò)誤。重新計(jì)算制作新的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
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