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組分 規(guī)格 | 5T | 20T | 50T | 開封后保存溫度 | 穩(wěn)定性 |
A.10 mM EdU | 100 μL | 0.4 mL | 1 mL | -20℃ | 開封后按指定溫度保存可有效放置一年 |
B.YF? 488/555/594/647A Azide | 25 μL | 100 μL | 250 μL | -20℃，避光 | |
C.10× Click-iT EdU反應緩沖液 | 500 μL | 2×1 mL | 5 mL | 2-8℃ | |
D.CuSO4 | 200 μL | 0.8 mL | 2×1mL | 2-8℃ | |
E.Click-iT EdU緩沖液添加物 | 15 mg | 60 mg | 150 mg | 2-8℃ |
規(guī)格：上述反應次數(shù)針對6孔板培養(yǎng)的細胞，不同容器的具體用量可參考附表1。熒光光譜數(shù)據(jù)：YF? 488 Azide：495/519 nm；YF? 555 Azide：555/565 nm；YF?594 Azide：590/617 nm；YF? 647A Azide：650/670 nm.產(chǎn)品介紹細胞增殖檢測是評估細胞健康程度、遺傳毒性及抗腫瘤藥物效果的基礎實驗手段。檢測細胞增殖最精確的方法是 BrdU 法。EdU 法檢測試劑盒是BrdU法的革命性突破。EdU （5-乙炔基-2’-脫氧尿苷）是一種嘧啶類似物，在 DNA 合成期整合入 DNA 雙鏈。EdU 法檢測基于“點擊”反應，一種由銅催化的疊氮化合物和炔烴作用發(fā)生共價反應，形成共價鍵。本試劑盒中，EdU 含有炔烴，YF?488/555/647A Azide 染料含有疊氮化合物。點擊法的 EdU 標記增殖快速有效，易于使用。BrdU 方法需要 DNA 變性（如酸變性、熱變性或者用 DNase 消化）暴露出 BrdU，方便 BrdU 抗體結合；而 EdU 法只需標準化的多聚甲醛固定和 Triton X-100 促滲就可以使檢測試劑進入細胞，只需少量的疊氮化染料即可非常有效地標記出整合的 EdU。本試劑盒包含EdU法檢測所需要的所有組分，可以用于體外培養(yǎng)細胞的增殖檢測。
UE-C6022S/C6022M/C6022L◆YF?488/555/594/647有什么區(qū)別？
主要就是檢測EDU的物質(zhì)帶的熒光基團不同，檢測時發(fā)射熒光的顏色不同。實驗效果相同，可根據(jù)偏好或需求進行選擇。◆EdU試劑盒中，固定后3% BSA in PBS的作用是什么？清洗步驟中，BSA可以終止掉未反應的甲醛。◆能否在活細胞中進行Click-iT EdU檢測？不可以。雖然EdU是對活細胞進行代謝標記，但是疊氮化物檢測試劑和緩沖液組分是細胞非透過型，檢測信號時的Click反應必須在固定和通透的樣品上進行。◆質(zhì)粒轉染表達的熒光蛋白檢測與Click反應兼容嗎？檢測順序是什么？本產(chǎn)品會影響GFP、RFP、mCherry等熒光蛋白的熒光，故染色后無法直接檢測GFP，建議使用GFP抗體間接檢測。◆觀測到較高的本底干擾，這是什么原因所致？如何減少本底干擾？疊氮化物和炔烴類間Click反應非常有選擇性，生物體內(nèi)幾乎不可能有副反應發(fā)生，所以本底較高一般是由洗滌不充分造成的。減少本底干擾的最佳方法是增加BSA洗滌的次數(shù)。同時，也可在同樣的檢測條件下設置一組同等處理的無染料或無Click反應對照，以排除自發(fā)熒光干擾。此外，您還可在無EdU 體系中進行完整的Click反應，驗證Click反應信號的特異性。◆為什么標記樣品無信號或特異性信號非常低？如何提高信號？1.請保證試劑使用時為無色的狀態(tài)，不要使用已經(jīng)變黃的添加劑或緩沖液；2.為確保Click反應試劑能夠到達核內(nèi)，細胞需要充分地固定和通透；3.由于銅離子能結合到部分試劑上，這會導致催化Click反應的有效濃度降低。所以在Click反應前，不要在任何緩沖液或試劑中引入金屬螯合劑（例如EDTA、EGTA、檸檬酸鹽等），對某些含有這些物質(zhì)的實驗樣品來說，進行Click反應前，可能需要增加額外的洗滌步驟；4.當銅離子在合適的化合價時，Click反應才有效。Click反應中用到的銅離子為二價銅(Cu2+)。5.延長Click反應的時間至超過30分鐘也并不會提高信號。建議使用新鮮的Click反應試劑再次進行30分鐘的孵育，可更有效地提高標記效率。◆如何對細胞核進行復染？試劑盒中配有Hoechst 33342，可以在Click反應后用于細胞核的染色，也可選擇使用DAPI。◆可以用于檢測植物細胞核內(nèi)的DNA復制嗎?可以。EdU是小分子，可以穿透植物細胞的細胞壁。
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